ELISA 技術

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ELISA 簡介

酶聯免疫吸附測定簡稱 ELISA。它是最重要的免疫測定方法之一。它可以使用包括抗體、抗原、蛋白質、糖蛋白和激素在內的實驗室技術來識別血液中某些物質的存在。

在這個過程中，抗體和抗原結合以獲得顯著的結果。抗體是由個體免疫系統產生的一種蛋白質。這種蛋白質可以與靶抗原的特定區域結合。在某些傳染病的情況下，我們可以檢測到體內抗體的存在。但這隻有在抗原-抗體結合成功的情況下才能成功。

ELISA 所需材料

ELISA 測試通常在 96 孔板中進行。主要目的是使用 96 孔板，因為可以在一個實驗中測試多個樣本。吸附板的主要特徵是抗原和抗體只能粘附在表面上。每種 ELISA 技術都測量特定的抗原。步驟如下：

• 有兩組抗體檢測選定的產物，如細胞因子。ELISA 板應塗有捕獲抗體。如果存在過量的抗體，則應將未結合的抗體從板上洗掉。

• 將樣品置於板上。板中已經塗覆的捕獲抗體附著在樣品中的任何抗原上。樣品具有不同的濃度。過量的樣品將從板上洗掉。

• 下一步是新增檢測抗體。辣根過氧化物酶或鹼性磷酸酶酶與檢測抗體混合。這種型別的抗體與任何靶抗原結合在一起。隨後應將底物新增到板上。在 ELISA 測定過程中，它們將物質轉化為有色產物。

• 使用光密度可以測量抗原濃度。

抗體-抗原結合

在單獨的抗原位點，抗體和抗原之間的相互作用強度發生。不同的抗體臂在每個抗原位點內的多個位點連線抗原。通常，抗體透過與抗原的弱共價力相互作用。如果它們之間的相互作用很強，則可以看到更強的親和力。抗原和抗體的穩定性和強度受三個主要因素控制。雖然其相互作用受許多因素的影響，包括 pH 值、溫度和離子強度。

原理

ELISA 技術的基本原理如下

• ELISA 過程在多孔板的固體表面上進行。

• 固體表面存在於抗原的固定化。

• 這可以透過捕獲抗體直接或間接地完成，捕獲抗體可以防止其自身在表面上的移動。

• 抗原從樣品中存在的其他成分中分離出來。這由分析師協助完成

• 在 ELISA 技術中，可以輕鬆測試多個樣本。

ELISA 的型別

圖片即將推出

直接 ELISA

• 它有助於發現樣品中抗體的存在。

• 板塗有抗原

• 在樣品板中，應新增抗原，這是第一個結合步驟。

• 板應在夜間孵育。

• 孵育完成後，應洗掉多餘的抗體。

• 將緩衝液新增到板中，並重新洗滌板。

• 為了偶聯酶，在那裡放置了一種特定的初級檢測抗體。

• 新增選定的酶偶聯初級檢測抗體。

• 藉助分光光度法計算有色產物的吸光度。

間接 ELISA

• 它有助於發現樣品中抗體的存在。

• 在這種方法中，抗體與樣品板的孔結合。

• 然後將來自樣品的抗體與塗有抗原的孔混合，以便它們可以彼此結合。

• 遊離的初級抗體將被洗掉。

• 透過新增與酶偶聯的次級抗體，抗原-抗體複合物的檢測成功。

• 下一步是擦掉遊離的次級抗體。

• 為了獲得有色產物，新增特定的物質。

• 藉助分光光度法計算有色產物的吸光度。

夾心 ELISA

• 透過這種方法檢測樣品中抗原的出現。

• 帶有多個孔的平板覆蓋有抗體。

• 在樣品中新增良好的抗原。遊離的抗原被洗掉。

• 酶與次級抗體結合，次級抗體也與另一種抗原結合。

• 遊離的次級抗體被洗掉。

• 為了獲得有色產物，將酶特異性物質新增到板上。

• 藉助分光光度法，測量有色產物吸光度。

競爭性 ELISA

• 透過這種方法檢測樣品中抗原的濃度。

• 在這種方法中，帶有多個孔的平板覆蓋有抗原。

• 然後孵育抗體。這是透過將抗原置於富含抗原的溶液中來完成的。

• 然後將抗原在含有抗原的溶液中孵育

• 然後在微量滴定孔中應放置抗體-抗原溶液。

• 洗掉過量的抗體。

• 新增與酶結合的次級抗體，該抗體可以識別孔中可用的初級抗體數量。

• 藉助分光光度法設定相同的吸光度

使用 ELISA 診斷的疾病

• 艾滋病毒。

• 萊姆病。

• COVID-19。

• 惡性貧血。

• 落基山斑疹熱。

• 鱗狀細胞癌。

• 梅毒。

• 妊娠試驗

ELISA 的優點

• ELISA 技術非常有效。

• 由於在這種方法中使用了抗體，因此檢測是在特定的機制中完成的

• 它具有較高的產量。市售的 ELISA 試劑盒以 96 孔板的形式出現，該測定法對 384 孔板有效。

• 操作簡單。此過程中涉及的步驟所需時間較短，並且非常容易理解。

• 此過程確定樣品中的抗原濃度。

• 它可以測試血清、血漿、細胞、組織提取物、尿液、唾液等的不同樣品。

ELISA 的應用

• 在食品行業，該方法用於識別食品中過敏原的存在。

• 在病毒檢測中，可以測量血清抗體的濃度。

• 它可以確定樣品中抗體和抗原的存在。

• 它可以評估疾病暴發期間疾病的傳播。

結論

ELISA 是最特異性和最重要的免疫測定方法之一。它可以使用包括抗體、抗原、蛋白質、糖蛋白和激素在內的實驗室技術來識別血液中某些物質的存在。

常見問題解答

Q1. 什麼是免疫測定法？

答：免疫測定法是一種生物化學檢測方法，用於檢測疾病，並基於抗原-抗體反應的原理。

Q2. 什麼是萊姆病？

答：細菌是導致萊姆病的原因。它透過受感染的黑色腿蜱的叮咬傳播。

Q3. HIV 的全稱是什麼？

答：HIV 的全稱為人類免疫缺陷病毒。

Q4. 2019 年爆發的病毒性疾病是什麼？

答：Covid 19 是一種於 2019 年爆發的病毒性疾病。