不同的分離和篩選技術是什麼？

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介紹

分離是分離單個細菌以研究其形態或用於工業目的的過程。

從自然環境（如土壤）中分離和篩選微生物的過程，這些環境具有大量的微生物種群，是一個昂貴且漫長的過程。例如，禮來公司在十年內篩選了 400,000 種生物體後，確定了三種主要型別的產生抗生素的微生物。

劃線是一種在微生物學中用於從單個微生物物種（通常是細菌）中分離純菌株的方法。為了識別、研究或測試生物體，可以從所得菌落中獲得樣本，並在新的培養皿上產生微生物培養物。

隨著羅伯特·科赫和其他微生物學家尋求細菌微生物培養物以進行研究，現代劃線平板法得到了改進。稀釋或劃線分離法最初由科赫實驗室的勒夫勒和加夫基設計，包括系統地將細菌劃過培養皿中瓊脂的表面，以產生分離的菌落，這些菌落隨後會擴充套件到大量細胞或分離的菌落。

分離

為了識別感興趣的微生物，從環境（即水或土壤）或生物體（皮膚、口腔或腸道菌群）中發現的自然混合的活生物體種群中分離出菌株。

劃線和傾倒平板是兩種廣泛用於細菌分離的技術。

劃線

劃線是一種快速且理想情況下簡單的分離稀釋技術。

遵循的方法或步驟

• 該方法包括將細菌數量從相對較高的濃度降低到較低的濃度。
• 細菌數量減少應該表明菌落間隔足夠遠，以影響各種微生物型別的分離。劃線使用清潔的工具進行，通常是接種環或棉籤。
• 微生物培養物使用無菌操作程式保持最新，這也有助於保持培養基清潔。
• 劃線平板的過程可以透過多種方式完成。選擇的技術取決於個人選擇以及樣品中存在的微生物數量。
• T 形劃線，一種三階段劃線模式，首先，使用火焰對接種環進行滅菌。
• 當冷卻後，將環浸入含有各種細菌物種的接種物中，例如肉湯或患者標本。
• 之後，接種環以鋸齒形圖案在瓊脂表面移動，直到覆蓋約 30% 的培養皿。然後將培養皿旋轉 90 度，同時重新滅菌環。
• 將環穿過先前劃過區域的兩到三次以繼續鋸齒形圖案。
• 然後執行此過程一次，注意不要接觸先前劃過的區域。

傾倒平板

對於專性厭氧微生物，傾倒平板法是一種典型的平板培養技術。

遵循的方法或步驟

• 此方法涉及連續稀釋，計算菌落形成單位，並用於分離微生物菌落（CFU）。
• 在此過程中，在瓊脂培養基有機會凝固之前，將液體樣品新增到培養皿中。
• 凝固後，菌落會在培養基內部和外部生長。然而，融合菌落生長在培養基內；表面上的菌落被計算為存活的。
• 在處理任何微生物溶液之前，請用抗菌溶液洗手。
• 在培養皿上寫下任何相關詳細資訊，包括您的姓名、日期、您使用的培養基和正在注射的培養物。
• 它可以懸浮在滅菌肉湯或水中以產生液體溶液。如果材料已經是液體，則準備其連續稀釋液以降低微生物菌落的濃度，微生物菌落的濃度不應超過 20-300 CFU/ml。可以進行高達 10-10 的稀釋。
• 開啟培養皿蓋，加入 1 毫升稀釋樣品進行接種。在將熔化的瓊脂稍微加熱後，將其倒在樣品上，約 15 到 18 毫升。

傾倒平板法的用途

科學家用它來計算給定樣品中細胞的濃度並獲得微生物生長曲線。

它還用於檢查各種環境和生長因素對細菌生長速率的影響。

篩選

篩選是從自然環境（如土壤）中尋找和分離微生物的過程，這些環境具有大量的微生物種群。這是一個昂貴且耗時的過程。

微生物的初篩

初篩可以描述為所需微生物產生所需產物（如抗生素、氨基酸或酶等）的定效能力，然後是所需微生物的檢測和分離。

微生物的復篩

復篩提供了大量相關資訊，例如在具有經濟價值的發酵過程中新分離的微生物。這些初步檢查在裝有液體培養基的燒瓶或小型發酵罐中進行，或在裝有固體培養基的培養皿中進行。

液體培養基方法比瓊脂平板法更準確，因為它提供了更多關於生物體對真實發酵生產環境的飲食、物理和生產反應的有意義的資料。

初篩和復篩技術

以下是初篩和復篩中廣泛使用的篩選技術

擁擠平板技術

這種初篩方法有助於識別能夠或不能產生抗生素的微生物。藉助天然底物，例如土壤或其他來源，決定使用“適當的等分試樣”進行“連續稀釋”，當將其接種到瓊脂平板上（也稱為擁擠平板）時，可以產生 300 到 400 個菌落。

指示劑染料技術

在此指示劑染料程式中，將碳酸鈣引入瓊脂培養基的一部分。因此，此方法可用於精確定位有機酸合成區域並識別正在產生該物質的菌落。可以透過向“營養瓊脂培養基”中新增“pH 指示劑染料”（如中性紅或溴百里酚藍）來測量 pH 值。

富集培養技術

通常，這是一種有助於分離土壤樣品中相對較少的微生物的技術，這些微生物可能具有對工業用途至關重要的營養需求。可以使用幾種二級程式來找出有關產品或微生物的關鍵資訊。

巨型菌落技術、過濾方法和液體培養基方法是眾多二級篩選過程的一些示例。

巨型菌落技術

利用這種方法識別能夠穿過固體培養基擴散的抗生素。這種方法利用鏈黴菌屬物種，它們可以在初篩期間產生抗生素。

過濾方法

這是一種關鍵技術，有助於測試無效的抗生素，這些抗生素是水溶性的，無法滲透到固體培養基中。還製作了各種抗生素稀釋液並新增到熔化的“瓊脂平板培養基”中以使其凝固。

液體培養基方法

這是一種獨特的二級篩選技術，有助於確定實際上分離了多少種產生抗生素的細菌，例如鏈黴菌屬。

結論

可以使用這些初級或二級方法來確定生物體或所需細胞的微生物學特徵。除了基本方法外，還可以使用簡單的方法來分離和檢測微生物。

因此，這是一種非常有用的程式，可以輕鬆識別細菌中表現出的生化特性，並且可以透過二次篩選發現有關所選微生物的所有關鍵資訊。